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智立中特(武漢)生物科技有限公司

廣泛分離、收集、保藏、交換和供應(yīng)各類微生物質(zhì)粒菌種;保存用于專利程序的各種可培養(yǎng)生物材料;質(zhì)粒載體類保藏技術(shù)研究;微…

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Lec1[Pro-5WgaRI3C]倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞

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產(chǎn)品品牌智立中特生物

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更新日期2022-10-10 14:55

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商品信息

基本參數(shù)

品牌:

智立中特生物

所在地:

湖北 武漢市

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產(chǎn)品規(guī)格:

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
詳細(xì)說(shuō)明

  

細(xì)胞名稱Lec1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)


  種屬中國(guó)倉(cāng)鼠


  年齡(性別)


  組織來(lái)源卵巢


  生長(zhǎng)特性貼壁


  細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣


  背景描述Lec1細(xì)胞是從脯氨酸缺陷型的CHO細(xì)胞克隆Pro-5中挑選出來(lái)的能抗麥芽凝集素的突變株。Lec1缺乏稱作GlcNAc-T1的糖基轉(zhuǎn)移酶,從而N-連接碳水化合物被阻斷在Man5GlcNAc2Asn中間體。Lec1細(xì)胞對(duì)于研究N-連接糖基化改變對(duì)內(nèi)源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)生的糖蛋白的功能和區(qū)隔化的影響十分有用。


  生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEMα+10%FBS+1%P/S


  培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃


  運(yùn)輸和保存


  干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞


  (1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。


  (2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。


  細(xì)胞接收后的處理


  1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。


  2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。


  3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。


  4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第,一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。


  一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:


  1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%,P/S1%


  2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。


  3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。


  二.細(xì)胞處理:


  1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:


  將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。


  2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。


  對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:


  1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。


  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。


  3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。


  3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。


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